ساخت محیط کشت MS

MS media culture

آموزش تهیه و ساخت محیط کشت MS

ساخت محیط کشت MS (موراشیگ و اسکوگ Murashige and Skoog) یکی از مهمترین و پرکاربردترین فعالیت ها در آزمایشگاه کشت بافت گیاهی است. محیط کشت موراشیگ و اسکوگ که به نام محیط کشت MS نیز شناخته می شود، این محیط کشت، بستری برای رشد سلول های گیاهی در آزمایشگاه است. محیط کشت ام اس برای تولید گیاهان مثمر و غیرمثمر به روش کشت بافت استفاده می شود.

نکته: محیط کشت MS یک محیط کشت عمومی است که برای بسیاری از گیاهان استفاده می شود اما با توجه به نوع گیاه، هدف از کشت سلول و مرحله رشدی ممکن است از محیط های کشت دیگری از جمله DKW ، WPM و … استفاده کرد. به عبارت دیگر برای تکثیر برخی از گیاهان به روش کشت بافت، محیط کشت MS کاربردی ندارد.

ترکیب محیط کشت MS

برای ساخت محیط کشت MS اجزای تشکیل دهنده به سه بخش کلی نمک های اصلی (Major Salt)، نمک های جزئی (Minor Salt) و ترکیبات آلی و ویتامین ها (Vitamins) تقسیم می شود.

دستور ساخت محیط کشت MS

جدول مقدار ترکیبات نمک های اصلی Major Salts برای یک لیتر محیط کشت MS

ردیف	نام فارسی ترکیب	نام انگلیسی	مقدار مصرف (mg/L)	فرمول شیمیایی
۱	نیترات آمونیوم	Ammonium Nitrate	۱۶۵۰	NH_۴NO_۳
۲	نیترات پتاسیم	Potassium Nitrate	۱۹۰۰	KNO_۳
۳	کلرید کلسیم	Calcium Chloride	۴۴۰	CaCl_۲ · 2H_۲O
۴	سولفات منیزیوم	Magnesium sulfate	۳۷۰	MgSO_۴ · 7H_۲O
۵	مونو پتاسیم فسفات	Monopotassium phosphate	۱۷۰	KH_۲PO_۴

.

جدول مقدار ترکیبات نمک های جزئی Minor Salts برای یک لیتر

ردیف	نام فارسی ترکیب	نام انگلیسی	مقدار مصرف	فرمول شیمیایی
۱	اسید بوریک	Boric Acid	۲/۶ mg/L	H_۳BO_۳
۲	کلرید کبالت II	Cobalt Chloride	۰/۰۲۵ mg/L	CoCl_۲ · 6H_۲O
۳	سولفات آهن II	Ferrous sulfate	۲۷/۸ mg/L	FeSO_۴ · 7H_۲O
۴	سولفات منگنز II	Manganese (II) sulfate	۲۲/۳ mg/L	MnSO_۴ · 4H_۲O
۵	یدید پتاسیم	Potassium iodide	۰/۸۳ mg/L	KI
۶	مولیبدات سدیم	Sodium molybdate	۰/۲۵ mg/L	Na_۲MoO_۴ · 2H_۲O
۷	سولفات روی	Zinc sulfate	۸/۶ mg/L	ZnSO_۴·7H_۲O
۸	سولفات مس II	Copper sulfate	۰/۰۲۵ mg/L	CuSO4 · 5H2O
۹	NaFe-EDTA	NaFe-EDTA	۵ ml/L	[CH_۲N(CH2CO2H)_۲]_۲

.

جدول مقدار ترکیبات آلی و ویتامین ها برای یک لیتر محیط کشت MS

ردیف	نام فارسی ترکیب	نام انگلیسی	مقدار مصرف	فرمول شیمیایی
۱	میو اینوسیتول	Myo-Inositol	۱۰۰ mg/L	C_۶H_۱۲O_۶
۲	اسید نیکوتینیک	Nicotinic Acid	۰/۵ mg/L	C_۶H_۵NO_۲
۳	پیریدوکسین. هیدروژن کلرید	Pyridoxine · hydrogen chloride	۰/۵ mg/L	C_۸H_۱۱NO_۳
۴	تیامین . هیدروژن کلرید	Thiamine· hydrogen chloride	۱.۰ mg/L	C_۱۲H_۱۷N_۴OS⁺
۵	گلایسین	Glycine	۲ mg/L	C_۲H_۵NO_۲

سه ترکیب آلی دیگر که شامل هورمون های گیاهی می شود نیز وجود دارد که در صورت نیاز می توان به محیط کشت MS افزود. اما در حالت کلی برای تهیه محیط کشت پایه، نیازی به این ترکیبات نیست. این ترکیبات عبارتند از:

تریپتون Tryptone 1 gr/L : مجموعه ای از پپتیدهایی هستند که با هضم کازئین توسط آنزیم تریپسین پروتئاز تشکیل می شود.
ایندول استیک اسید Indole Acetic Acid: حدود ۱ تا ۳۰ میلی گرم در لیتر
کاینتین Kinetin : حدود ۰/۰۴ تا ۱۰ میلی گرم در لیتر

کیت کامل محیط کشت MS

سپس باید محلول تهیه شده بوسیله آب مقطر به حجم یک لیتر برسد. پس از افزایش حجم، مقدار ۳۰ گرم در لیتر ساکارز اضافه کرده و Ph محلول بوسیله Ph متر باید روی ۵/۸ تنظیم شود. پس از اندازه گیری اسیدیته (Ph)، مقدار ۷ گرم آگار اضافه کرده و بوسیله همزن های حرارتی کاملا مخلوط می شوند.